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ELISA實驗中溫育需要注意的細(xì)節(jié)
日期：2024-09-20 04:46
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摘要：而溫育又是ELISA測定中影響測定成敗關(guān)鍵的一個因素。ELISA作為一種固相免疫測定，抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)在固相上進(jìn)行，要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原完全結(jié)合，必須在一定的溫度條件下反應(yīng)一定的時間。溫育所需時間與溫度成反比，即溫度越高，則所需時間相對較短。常用的溫育溫度有37℃和室溫，其次是43℃和2～8℃。擅自改變說明書操作，使用自己喜歡的溫育時間和溫育溫度，造成一些不必要的麻煩。因為，不同試劑盒有不同的溫育時間和溫育溫度的選擇，隨意更改溫育時間或者溫育溫度將導(dǎo)致試驗結(jié)果出現(xiàn)偏差。因此，關(guān)于溫育，在實際測定操作中一定要注意以下幾點：
1、要保證在設(shè)定的溫度下有足夠的反應(yīng)時間。具體的做法是，用一小溫度計放置板孔反應(yīng)溶液中測量觀察即可。
2、溫育溫度的選擇。我們建議在臨床ELISA測定中盡量使用較低溫育溫度較長反應(yīng)時間的條件。
3、“邊緣效應(yīng)”的排除。使用水浴或在將反應(yīng)溶液加入至板孔中時，將板和溶液均加熱至溫育溫度(如37℃)，就可以很容易地排除“邊緣效應(yīng)”，并且可提高測定的重復(fù)性。
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ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。
在檢測時，受檢標(biāo)本（測定其中的抗原）與固相載體表面的抗體反應(yīng)。洗滌后加入酶標(biāo)記的抗體，通過反應(yīng)結(jié)合在固相載體上。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。
而溫育又是ELISA測定中影響測定成敗關(guān)鍵的一個因素。ELISA作為一種固相免疫測定，抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)在固相上進(jìn)行，要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原完全結(jié)合，必須在一定的溫度條件下反應(yīng)一定的時間。溫育所需時間與溫度成反比，即溫度越高，則所需時間相對較短。常用的溫育溫度有37℃和室溫，其次是43℃和2～8℃。擅自改變說明書操作，使用自己喜歡的溫育時間和溫育溫度，造成一些不必要的麻煩。因為，不同試劑盒有不同的溫育時間和溫育溫度的選擇，隨意更改溫育時間或者溫育溫度將導(dǎo)致試驗結(jié)果出現(xiàn)偏差。因此，關(guān)于溫育，在實際測定操作中一定要注意以下幾點：
1、要保證在設(shè)定的溫度下有足夠的反應(yīng)時間。具體的做法是，用一小溫度計放置板孔反應(yīng)溶液中測量觀察即可。
2、溫育溫度的選擇。我們建議在臨床ELISA測定中盡量使用較低溫育溫度較長反應(yīng)時間的條件。
3、“邊緣效應(yīng)”的排除。使用水浴或在將反應(yīng)溶液加入至板孔中時，將板和溶液均加熱至溫育溫度(如37℃)，就可以很容易地排除“邊緣效應(yīng)”，并且可提高測定的重復(fù)性。