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蛋白質(zhì)的分離純化的注意事項
日期：2024-09-20 04:47
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摘要：1.為了避免蛋白質(zhì)變性，不要對樣品劇烈攪動和反復凍融。
2.緩沖溶液成分盡量模擬細胞內(nèi)環(huán)。。
3.為了避免蛋白質(zhì)的氧化，將0.1~1mmol/LDTT（二硫蘇糖醇）(或β-巰基乙醇）加入到緩沖溶液中。
4.為了避免重金屬對目標蛋白的破壞，將1~10mmol/LEDTA金屬螯合劑加入。
5.為了避免微生物生長，使用清洗溶液。在純化任何一種蛋白質(zhì)的時候，均必須時刻對它的穩(wěn)定性注意維護，使它的活性得到保護，需要牢記如下一些通用的注意事項。
6.盡可能置于冰上或者在冷庫內(nèi)進行操作。
7.蛋白濃度不要太稀。
8.除非是進行聚焦層。否則pH需要合適，防止所使用的緩沖溶液pH與pI相同，使蛋白質(zhì)的沉淀得以避免。
9.使用蛋白酶抑制劑，避免蛋白酶對目標蛋白的降解；在純化細胞中的蛋白質(zhì)時，將DNA酶加入來使得DNA降解，避免DNA對蛋白的污染。
蛋白質(zhì)的分離純化在生物化學研究應用中使用廣泛，是一項重要的操作技術(shù)。 一個典型的真核細胞可以包含數(shù)以千計的不同蛋白質(zhì)，一些含量十分豐富，一些僅含有幾個拷貝。為了研究某一個蛋白質(zhì)，必須先將該蛋白質(zhì)從其他蛋白質(zhì)和非蛋白質(zhì)分子中純化出來。那么純化的時候需要注意的細節(jié)是哪些呢？
注意事項
1.為了避免蛋白質(zhì)變性，不要對樣品劇烈攪動和反復凍融。
2.緩沖溶液成分盡量模擬細胞內(nèi)環(huán)。。
3.為了避免蛋白質(zhì)的氧化，將0.1~1mmol/LDTT（二硫蘇糖醇）(或β-巰基乙醇）加入到緩沖溶液中。
4.為了避免重金屬對目標蛋白的破壞，將1~10mmol/LEDTA金屬螯合劑加入。
5.為了避免微生物生長，使用清洗溶液。在純化任何一種蛋白質(zhì)的時候，均必須時刻對它的穩(wěn)定性注意維護，使它的活性得到保護，需要牢記如下一些通用的注意事項。
6.盡可能置于冰上或者在冷庫內(nèi)進行操作。
7.蛋白濃度不要太稀。
8.除非是進行聚焦層。否則pH需要合適，防止所使用的緩沖溶液pH與pI相同，使蛋白質(zhì)的沉淀得以避免。
9.使用蛋白酶抑制劑，避免蛋白酶對目標蛋白的降解；在純化細胞中的蛋白質(zhì)時，將DNA酶加入來使得DNA降解，避免DNA對蛋白的污染。
上海通蔚生物科技有限公司擁有自己的實驗室，備有業(yè)的技術(shù)研發(fā)團隊，長期致力于各種生物試劑，細胞，血清，ELISA試劑盒的研發(fā)與銷售，實驗提供免費代測服務，并提供精湛的技術(shù)服務，如果您有實驗上的問題歡迎來咨詢，為您提供業(yè)的一對一技術(shù)指導。
注意事項
1.為了避免蛋白質(zhì)變性，不要對樣品劇烈攪動和反復凍融。
2.緩沖溶液成分盡量模擬細胞內(nèi)環(huán)。。
3.為了避免蛋白質(zhì)的氧化，將0.1~1mmol/LDTT（二硫蘇糖醇）(或β-巰基乙醇）加入到緩沖溶液中。
4.為了避免重金屬對目標蛋白的破壞，將1~10mmol/LEDTA金屬螯合劑加入。
5.為了避免微生物生長，使用清洗溶液。在純化任何一種蛋白質(zhì)的時候，均必須時刻對它的穩(wěn)定性注意維護，使它的活性得到保護，需要牢記如下一些通用的注意事項。
6.盡可能置于冰上或者在冷庫內(nèi)進行操作。
7.蛋白濃度不要太稀。
8.除非是進行聚焦層。否則pH需要合適，防止所使用的緩沖溶液pH與pI相同，使蛋白質(zhì)的沉淀得以避免。
9.使用蛋白酶抑制劑，避免蛋白酶對目標蛋白的降解；在純化細胞中的蛋白質(zhì)時，將DNA酶加入來使得DNA降解，避免DNA對蛋白的污染。
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